CNW HPLC高效液相色谱溶剂
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CNW HPLC高效液相色谱溶剂 

通常来说,HPLC对流动相的基本要求是:①与固定相不互溶,不发生化学反应;②对样品有适宜的溶解度,要求k值在1~10范围内(可用范围)或2~5(最佳范围),溶解度太大,k值太小,不利于分离;溶解度太小,k值太大,可能使样品在流动相中产生沉淀;③必须与检测器相适应。例如用紫外检测器,流动相本身在检测波长处应无吸收;④流动相的粘度要小,可以降低色谱柱的阻力而提高柱效;⑤纯度高,不含机械杂质。

高效液相色谱流动相的选择及注意事项如下:

1、 流动相的性质要求。一个理想的流动相溶剂应具有低粘度、与检测器兼容性好、易于得到纯品和低毒性等特征。 选好填料(固定相)后,强溶剂使溶质在填料表面的吸附减少,相应的容量因子k降低;而较弱的溶剂使溶质在填料表面吸附增加,相应的容量因子k升高。理论塔板数N一般与流动相的粘度成反比。所以选择流动相时应从以下几个方面考虑: ① 流动相不得改变填料的任何性质。低交联度的离子交换树脂和排阻色谱填料有时遇到某些有机相会溶胀或收缩,从而改变色谱柱填床的性质。碱性流动相不能用于硅胶柱系统。酸性流动相不能用于氧化铝、氧化镁等吸附剂的柱系统。②纯度。色谱柱的寿命与流动相有较大的关系,特别是其所含杂质在柱上有大量沉积的溶剂。③与检测器匹配。使用紫外检测器时,所用流动相在检测波长

 

 

 

 

 

 

 

 
 

下不得有吸收,或吸收很小。④粘度要低。高粘度溶剂会影响溶质的扩散、传质,降低柱效,还会使柱压增加,分离时间延长。最好选择沸点在100℃以下的流动相。

2、流动相的pH值。 采用反相色谱法分离弱酸或弱碱样品时,通过调节流动相的pH值,以抑制样品组分的解离,增加组分在固定相上的保留,并改善峰形的技术称为反相离子抑制技术。对于弱酸,流动相的pH值越小,组分的k值越大,当pH值远远小于弱酸的pKa值时,弱酸主要以分子形式存在;对弱碱,情况相反。分析弱酸样品时,通常在流动相中加入少量弱酸,常用50mmol/L磷酸盐缓冲液和1%醋酸溶液;分析弱碱样品时,通常在流动相中加入少量弱碱,常用50mmol/L磷酸盐缓冲液和30mmol/L三乙胺溶液。

3、流动相的选择。 在化学键合相色谱法中,溶剂的洗脱能力直接与它的极性相关。在正相色谱中,溶剂的强度随极性的增强而增加;通常采用烷烃加适量极性调整剂。 反相色谱的流动相通常以水作基础溶剂,再加入一定量的能与水互溶的极性调整剂,如甲醇、乙腈等。极性调整剂的性质及其所占比例对溶质的保留值和分离选择性有显著影响。一般情况下,甲醇-水系统能满足多数样品的分离要求,且粘度小、价格低,是反相色谱最常用的流动相。

4、流动相的滤过。所有溶剂使用前都必须经0.45μm滤膜滤过,以除去杂质,色谱纯试剂也不例外。用滤膜过滤时,特别要注意分清有机相滤膜和水相滤膜。有机相滤膜一般用于过滤有机溶剂,过滤水溶液时流速低或滤不动。水相滤膜只能用于过滤水溶液,严禁用于有机溶剂,否则滤膜会被溶解。溶有滤膜的溶剂不得用于HPLC,对于混合流动相,可在混合前分别滤过,如需混合后滤过,首选有机相滤膜。对于冰箱过夜保存的流动相,在使用前仍建议过滤后再使用。

5、流动相的脱气。所用流动相必须先脱气,否则容易产生气泡,影响泵的正常工作。气泡还会影响柱的分离效率,影响检测器的灵敏度、基线稳定性,甚至无法检测。此外,溶解在流动相中的氧还可能与样品、流动相甚至固定相反应。溶解气体还会引起溶剂pH值的变化,结果容易产生误差。 溶解氧能与某些溶剂(如甲醇、四氢呋喃)形成有紫外吸收的络合物,此络合物会提高背景吸收,并导致检测灵敏度的轻微降低,但更重要的是,会在梯度淋洗时造成基线漂移。超声脱气比较好,20分钟的脱气时间基本上就够了。

6、流动相的制备。用高纯度的试剂配制流动相,必要时照紫外分光光度法进行溶剂检查,应符合要求,水应为新鲜制备的高纯水,利用超级纯水器制得或用重蒸馏水。凡规定pH值的流动相应使用精密pH计进行调节。应配制足量的流动相备用。

7、流动相的贮存。流动相一般贮存于玻璃、聚四氟乙烯或不锈钢容器内,不能贮存在塑料容器中。因许多有机溶剂如甲醇、乙酸等可浸出塑料表面的增塑剂,导致溶剂受污染。这种被污染的溶剂如用于HPLC系统,可能造成柱效降低。贮存容器一定要盖严,防止溶剂挥发引起组成变化,也防止氧和二氧化碳溶入流动相。 磷酸盐、乙酸盐缓冲液很易长霉,应尽量新鲜配制使用。

CNW高效液相色谱溶剂具有以下优点:

● 低紫外线吸收,确保最佳灵敏度;
● 严格控制非挥发性物质、游离酸、游离碱和水的含量至最低;
● 可用于荧光检测;
● 严格的梯度测试以检测干扰峰和基线漂移情况;
 

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